干貨 | 原來色譜柱長(zhǎng)度對(duì)分離度影響這么大？實(shí)踐告訴你不知道的秘密

色譜柱使用過程中你是否有遇到分離度的問題：

減小粒徑，擔(dān)心柱壓太高？

增加柱長(zhǎng)，擔(dān)心分離度增加幅度太小？

來來，小編來教你一招

試試縮短柱長(zhǎng)吧

既能提高分離度，還能降低成本

一、有趣的實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象，有圖有真相

       以三七含量測(cè)定為例，色譜柱柱長(zhǎng)從250mm縮短為150mm，一起來看看譜圖變化吧。

（1）Athena C18-WP  4.6 × 250mm, 5μm

（LAEQ-462572，三七含量測(cè)定）

（2）Athena C18-WP  4.6 × 150mm, 5μm

（LAEQ-461572，三七含量測(cè)定）

       綜上，三七含量測(cè)定時(shí)，色譜柱柱長(zhǎng)從250mm縮短為150mm，人參皂苷Rg1和相鄰雜質(zhì)峰的分離度從1.41增大到了1.74。

二、透過現(xiàn)象看本質(zhì)，不違背基本規(guī)律

       通常較長(zhǎng)的色譜柱，柱效更高，分離效果更好，而上述的實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象是相反的，它是怎么發(fā)生的呢？我們來分析一下：

       流動(dòng)相的梯度程序如下：

       從出峰時(shí)間，我們可以估算Rg1出峰時(shí)流動(dòng)相的組成（流動(dòng)相中乙腈的比例）：

       我們可以看出，和Athena C18-WP  4.6 × 250mm, 5μm相比，采用Athena C18-WP  4.6 × 150mm, 5μm，人參皂苷Rg1出峰時(shí)乙腈的比例更低，我們知道，反相色譜分離模式，降低流動(dòng)相中有機(jī)相的比例，有利于提高分離度，而此時(shí)由于長(zhǎng)度縮短、柱效降低引起的分離度下降起到次要作用，綜合結(jié)果，分離度得到改善。

三、現(xiàn)實(shí)條件不滿足，怎么辦？

       如果我們手頭沒有150mm的色譜柱，實(shí)驗(yàn)又比較著急，我們還可以嘗試提高流速的方法，下邊還是以三七含量測(cè)定為例子，采用Athena C18-WP  4.6 × 250mm, 5μm，流速從1.0ml/min提高到1.2ml/min，人參皂苷Rg1出峰時(shí)間提前，出峰時(shí)乙腈的比例更低，人參皂苷Rg1和相鄰雜質(zhì)的分離度從1.41提高到1.52。

        溫馨提示：此例子僅是為了提供一個(gè)思路，雖然通過改變流速，Rg1和相鄰雜質(zhì)峰分離改善，但同時(shí)引起Rb1受到雜質(zhì)峰的干擾，此案例該方法不可行。

四、總結(jié)

       梯度洗脫時(shí)，遇到分離度問題，可以嘗試縮短柱長(zhǎng)或者提高流速的方法，此時(shí)是出峰時(shí)有機(jī)相比例降低造成的分離度提高和柱效降低引起的分離度下降的一個(gè)較量。如果前者起主要作用，分離度可以得到改善，如果后者起到主要作用，會(huì)導(dǎo)致分離度下降。

五、彩蛋時(shí)刻

       三七含量測(cè)定過程，經(jīng)常會(huì)遇到分離度、基線漂移等問題，各個(gè)廠家也紛紛推出柱，采用安譜Athena C18 4.6 × 150mm, 5μm（LAEQ-461571），即可輕松實(shí)現(xiàn)柱的效果。

1. 良好的分離性能

       采用安譜實(shí)驗(yàn)Athena C18 4.6 × 150mm, 5μm（LAEQ-461571）色譜柱，按照2015版《中國(guó)藥典》條件，做三七含量測(cè)定，三七皂苷R1的柱效遠(yuǎn)大于4000，人參皂苷Rg1和相鄰雜質(zhì)峰分離度達(dá)到2.1。

2. wan美的批次重現(xiàn)性

       采用3個(gè)不同批次的Athena C18 4.6 × 150mm, 5μm（LAEQ-461571）色譜柱，做三七含量測(cè)定，三七皂苷R1的柱效都遠(yuǎn)大于4000，三七皂苷R1的出峰時(shí)間以及人參皂苷Rg1和相鄰雜質(zhì)峰的分離度都能得到很好的重現(xiàn)。

3. 優(yōu)異的穩(wěn)定性

       采用Athena C18 4.6 × 150mm, 5μm（LAEQ-461571）色譜柱，做三七含量測(cè)定，連續(xù)進(jìn)供試品溶液100針，三七皂苷R1的柱效、人參皂苷Rg1和相鄰雜質(zhì)峰的分離度保持穩(wěn)定，Athena C18 4.6 × 150mm, 5μm（LAEQ-461571）色譜柱具有優(yōu)異的穩(wěn)定性。