水中總氮空白值居高不下怎么辦？

     總氮（TN）是衡量水質的一個重要指標之一。其測定有助于評價水體被污染和自凈狀況。地表水中氮、磷物質超標時，微生物大量繁殖，浮游生物生長旺盛，出現富營養化狀態。總氮的定義是水中各種形態無機和有機氮的總量。包括NO3-、NO2-和NH4+等無機氮和蛋白質、氨基酸和有機胺等有機氮，以每升水含氮毫克數計算。常被用來表示水體受營養物質污染的程度。

     水質總氮的測定方法主要有堿性過硫酸鉀紫外分光光度法（HJ 636-2012），氣相分子吸收光譜法，氨氮、硝酸根分別測定方法等，而堿性過硫酸鉀紫外分光光度法在環境地表水、水質檢測領域應用廣泛。

     在使用過硫酸鉀消解測試總氮的時候，不知道小伙伴們有沒有為空白值不穩定而苦惱？

     HJ 636-2012中規定了每批樣品應至少做一個空白實驗，且要求空白試樣的校正吸光度應小于0.030。有些小伙伴有時會忽略0.030的要求，當空白值大于0.030時，則直接用測試值減去空白值進行計算，這樣的方法，對低氮含量的測試的準確性影響是非常大的。

說到校正吸光度，我們先來看一下校正吸光度的公式：

     堿性過硫酸鉀消解紫外分光光度法測定總氮的原理是：利用過硫酸鉀的氧化性，將水樣中的氨氮、亞硝酸鹽氮及大部分有機氮化合物氧化為硝酸鹽。硝酸根離子在220nm波長處有吸收，而溶解的有機物在此波長下也有吸收；在275nm波長處，有機物有吸收而硝酸根離子沒有吸收，所以利用兩個波長下的吸光度對硝酸鹽氮值進行校正，公式中2倍為溶解在水中有機物在220nm和275nm處吸光度的經驗系數。

     那么，具體有哪些因素會影響到空白吸光度呢？通過大量客戶實驗中的“慘痛教訓”，我們為大家總結了過硫酸鉀空白值不穩定的幾點原因：

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所用試劑

     部分過硫酸鉀合成過程以硫酸銨為原料，這也是導致空白值高于0.030的一個原因，因此，需使用符合國標要求的試劑，即總氮小于0.0005%的過硫酸鉀和氫氧化鈉。市售過硫酸鉀質量參差不齊，很多過硫酸鉀只標注了純度，而沒有總氮指標。我們對同一品牌過硫酸鉀的不同批次，以HJ 636-2012附錄A中的方法測試挑選了含量為0.001%和0.0005%的過硫酸鉀，并配制成堿性過硫酸鉀溶液進行空白測試：

     結果表明，雖然兩種過硫酸鉀空白值相差不大，但總氮含量越低，空白值也相應降低。同時由于總氮測試方法不同，由不同方法得到的過硫酸鉀總氮值略有差異，建議在實驗前先以HJ 636-2012中條件做空白實驗，以驗證過硫酸鉀是否符合要求。

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消解時間

     HJ 636-2012中規定了消解時間為30min，自然冷卻并開閥放氣，將比色管冷卻至室溫再進行后續操作。經實驗測試，過硫酸鉀和氫氧化鈉本身在220nm處也有較強的吸收，自然冷卻可以讓高壓滅菌器中溫度在一段時間內繼續保持在一個相對較高的水平，以此保證過硫酸鉀*反應，否則殘留的過硫酸鉀便會對空白值產生影響。而我們在實驗中，可以適當將消解時間延長至40min，以保證過硫酸鉀*反應。下表中列出不同消解時間，空白吸光度的數值：

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其他因素

     HJ 636-2012中使用的玻璃器皿也會對總氮測試空白值產生影響，當空白比色管在有氨污染的環境下存放一段時間，空白吸光度也會受到影響。建議每次使用完畢后，用1+9的硫酸溶液浸泡比色管（消解氮含量高的樣品后，可使用1+3硫酸溶液浸泡），并用無氨水沖洗干凈再使用。

     高壓滅菌器在工作中為*密閉狀態，但其中的水分會在高壓下蒸發，因此其清潔程度也會對空白值造成影響，經常消解高氮源的實驗室，需定時清洗高壓滅菌器并換水，以保證每批次處理的試樣的準確性不受干擾。

*[1]百度百科，總氮

  [2]潘小敏，馬建騰，陳潔.吸光度計算公式A=A220-2A275對結果影響及使用范圍的探討[J].輕工科技, 2013, 5(5).

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